糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)漆酶POXA1在里氏木霉中的高效表达及酶学性质

• 作者: 秦丽娜 董志扬 董欣睿 陶勇 黄建忠
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 漆酶 里氏木霉 cbhl启动子 异源表达 糙皮侧耳
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 850-856
• 分类号: Q814
• 语种: 中文

摘要

[目的]将优化后的糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)漆酶基因poxl,在里氏木霉中进行高效表达并对重组表达的漆酶进行酶学性质测定.[方法]:根据里氏木霉的密码子偏好性,对漆酶POXA1密码子进行优化并合成.以质粒pBluscriptⅡSK(+)为骨架,利用里氏木霉纤维二糖水解酶基因(cbhl)的启动子和终止子序列构建里氏木霉外源蛋白表达载体pSKLDT.PEG介导的原生质体转化方法转化里氏木霉菌株Tu6,筛选获得漆酶表达工程菌；通过木霉工程菌摇瓶发酵培养后对发酵液上清中的漆酶进行纯化,并对异源表达的漆酶酶学性质进行研究.[结果]经尿嘧啶缺陷培养基筛选获得木霉阳性转化子,通过PCR分析及漆酶酶活性筛选获得漆酶高效表达重组菌LC-7,该重组菌经摇瓶发酵144h后粗酶液酶活达237.134IU/mL,酶活较其出发菌Pleurotus ostreatus提高了28.6倍.酶学性质研究表明,纯酶的比活为9852IU/mg,最适温度为50℃,最适pH为3.0,最适底物为ABTS,该漆酶催化ABTS的Km和Vmax分别为7.58×10-2 mmol/L及9.752×10-3mmol/L/min,金属离子Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mn2+、Ba2+、Mg2+等对漆酶有不同程度的抑制作用,但Fe2+能明显的抑制漆酶的催化活性.[结论]外源漆酶基因能在里氏木霉中实现高效分泌表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄建忠	福建师范大学生命科学学院工业微生物教育部工程研究中心	125	695	15.0	20.0
2	董志扬	中国科学院微生物研究所	46	1048	16.0	31.0
3	陶勇	中国科学院微生物研究所	49	311	9.0	16.0
4	秦丽娜	中国科学院微生物研究所	4	22	2.0	4.0
5	董欣睿	福建师范大学生命科学学院工业微生物教育部工程研究中心	1	11	1.0	1.0