两面针ISSR-PCR反应体系的建立及优化

• 作者: 严萍 张蕾 詹若挺 陈蔚文 韩正洲
• 来源期刊: 广州中医药大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 两面针 ISSR-PCR反应体系 单因素分析 正交试验
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 中药生物工程
• 页码范围: 70-74
• 页数: 5页
• 分类号: R194.5
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立适合两面针简单重复序列—聚合酶链反应(ISSR-PCR)体系和扩增程序.[方法]采用改良的高盐低pH法提取两面针基因组DNA,通过单因素试验和正交试验相结合对ISSR反应体系中的主要成分(Mg2+、Taq DNA聚合酶、引物和模板)进行筛选和优化,并考察退火温度对扩增结果的影响.[结果]最佳的PCR反应体系为:总体积为25μL,含1.50 mmol/L Mg2+、150 μmol/L dNTPs、0.04U/μL TaqDNA聚合酶、0.60 μmol/L引物、2.40 ng/μL DNA模板.扩增程序为:94℃预变性5 min; 94℃变性30 s,51.4℃退火45 s,72℃延伸2 min；35个循环；72℃再延伸10 min.[结论]优化了两面针ISSR-PCR反应体系和扩增程序,为两面针ISSR遗传多样性分析打下基础.