沉默Bmi-1基因表达稳定细胞株的建立及其生物学特性的研究

• 作者: 余华荣 刘革力 卜友泉 宋方洲 易发平 武向梅 汪长东 苟小燕 邓小园
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 医学
• 关键词: Bmi-1基因 乳腺癌 RNA干扰 MCF-7细胞
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 158-163
• 分类号: R737
• 字数: 5623字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7847.2012.02.012

摘要

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1 (B-cell-specific moloney murine leukemia virus insertion site 1,Bmi-1)基因是多梳基因家族成员,参与细胞增殖调控.研究发现Bmi-1基因可能参与肿瘤的形成,可能成为肿瘤潜在的治疗靶点.用RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默Bmi-1基因表达观察其对乳腺癌细胞株MCF-7侵袭和转移等生物学特性的影响,以探讨Bmi-1在乳腺癌发生发展中的作用.PT67细胞包装质粒后产生的逆转录病毒感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选建立稳定细胞株,稳定抑制Bmi-1的细胞株命名为MCF-7/Bmi-1si.通过RT-PCR和Westemblot分别从mRNA和蛋白水平检测Bmi-1的表达量；平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭和转移能力.MCF-7/Bmi-lsi组与MCF-7和MCF-7/GFPsi组相比,Bmi-1 mRNA和蛋白表达量明显减少,克隆形成数及形成率也明显减少(P＜0.05).侵袭和转移实验表明:与MCF-7和MCF-7/GFPsi组相比,MCF-7/Bmi-1 si组细胞在Transwell侵袭小室中24 h穿膜细胞数明显减少(P＜0.05).结果表明沉默Bmi-1基因表达稳定细胞株构建成功,Bmi-1基因表达的沉默能显著降低MCF-7细胞的体外增殖及侵袭转移能力.