克隆猿猴病毒40增强子修饰人乙酰肝素酶基因核心启动子及活性分析

• 作者: 王永 陈晓鹏
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 乙酰肝素酶 启动子 增强子
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 12-18
• 分类号: R-33
• 字数: 5294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2012.01.003

摘要

目的:克隆猿猴病毒40(simian virus 40,SV40)增强子序列,修饰人乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)基因核心启动子,并分析其活性.方法:PCR扩增SV40增强子序列并测序鉴定,酶切连接插入到pEGFP-HPSEp中指定克隆位点构建重组质粒pEGFP-HPSEp-SV40enh.将原质粒、重组质粒和阳性对照质粒分别转染肝癌细胞(HepG2)、喉癌上皮细胞(Hep2)和慢性白血病细胞(K562).荧光显微镜观察和流式细胞术分析各质粒促转录活性.结果:扩增的SV40增强子序列长度为237 bp,序列分析与GeneBank收录一致.重组质粒pEGFP-HPSEp-SV40enh经酶切和测序鉴定与预期结果一致,SV40增强子序列插入到指定克隆位点.荧光显微镜观察显示,转染pEGFP-HPSEp-SV40enh的HepG2、Hep2和K562细胞均有较强荧光表达;转染pEGFP-HPSEp的细胞荧光强度均较弱.流式细胞术检测表明,pEGFP-HPSEp-SV40enh在HepG2、Hep2和K562细胞的平均转染率分别为3.7%、6.0%和5.5%,pEGFP-HPSEp转染率分别为4.8%、13.4%和7.7%,两者比值均小于1.结论:成功克隆了SV40增强子序列并构建了重组质粒pEGFP-HPSEp-SV40enh,SV40增强子可以初步提高HPSE启动子的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈晓鹏	南京市浦口区中医院普外科	80	361	10.0	16.0
3	王永	南京市浦口区中医院普外科	1	2	1.0	1.0