新基因hSSB1逆转录病毒载体的构建、鉴定和稳定株的筛选

• 作者: 康铁邦 张如华 徐双兵 武远众
• 来源期刊: 中山大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: hSSB1 病毒载体 稳定株
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 页码范围: 73-76,85
• 分类号: R73-3
• 字数: 3272字
• 语种: 中文

摘要

hSSB1(Human Single-strand DNA-binding protein)是参与细胞DNA损伤应答的一个重要信号分子.根据GenBank提供的hSSB1基因序列扩增其cDNA序列,插入到pBABE逆转录病毒载体中,连接后的质粒转化后经过双酶切,PCR扩增及测序来鉴定pBABE-hSSB1阳性克隆.将阳性表达的pBABE-hSSB1和包装质粒转染到HEK293T细胞中,产生病毒液.将包装好的病毒感染细胞并用嘌呤霉素(puromycin)筛选稳定表达hSSB1的细胞株.重组pBABE-hSSB1质粒经双酶切,PCR扩增鉴定及DNA测序分析等方法证实克隆成功.Western blotting 检测发现转染重组质粒pBABE-hSSB1的细胞株中hSSB1蛋白的表达水平高于对照组.该研究成功构建了针对hSSB1基因的逆转录病毒载体(pBABE-hSSB1),并得到了稳定高表达hSSB1的细胞株,为深入研究其功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张如华		4	22	2.0	4.0
3	徐双兵		2	5	2.0	2.0
5	康铁邦		2	5	2.0	2.0
11	武远众		1	2	1.0	1.0