在单细胞水平建立原位PCR基因鉴别技术平台——以精子基因型鉴别为例

• 作者: 朱宝长 朱璇 邵伫雄
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 生物学
• 关键词: HSL基因 SRY基因 精子 荧光原位PCR FITC(异硫氰酸荧光素)
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论著
• 页码范围: 1-5
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4007字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-6179.2012.01.001

摘要

目的 精子发生是一个包括有丝分裂和减数分裂的精细调控过程,这一过程是从精原干细胞开始在雄性睾丸的曲细精管中完成的,由哺乳动物雌雄性比例接近1∶1这一现象可以推知:受精时带X基因的精子和带Y基因的精子比率应该是1∶1,但事实上精子发生的过程中,分化出来的X、Y精子的比例是否也为1∶1并不清楚,因为精子发生过程中并不是所有细胞都能最终形成精子,然而要研究雌雄出生比率就需要先研究精子本身是否严格地按照1∶1形成,因此本实验通过建立快速可靠原位PCR技术平台为进一步研究精子发生的调控过程提供支持.步骤用HSL基因优化荧光原位PCR实验方案,包括蛋白酶K作用时间和浓度,原位PCR前先对精子进行解聚,再用SRY基因对精子进行原位PCR鉴定.结果 在荧光显微镜下可清楚地看到精子头部的荧光信号,头部有绿色荧光信号的精子为带有SRY基因的Y染色体精子(Y精子),实验检测到昆明小鼠精子共493个,有信号的共273个,X∶Y=55.37％,经卡方检验,X精子与Y精子的实验结果趋近于1∶1.结论 可利用荧光原位PCR技术在单细胞水平快速鉴定精子“性别”,理论上可用于任何细胞的任何基因的鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱宝长	首都师范大学生命科学学院细胞生物学实验室	38	146	7.0	10.0
2	朱璇	首都师范大学生命科学学院细胞生物学实验室	1	3	1.0	1.0
3	邵伫雄	首都师范大学生命科学学院细胞生物学实验室	1	3	1.0	1.0