TaqMan探针实时PCR检测人MTHFR基因C677T多态性方法的建立

• 作者: 于建春 刘锦云 吕雪梅 王克华 王苏梅 盖凌 董云玲 魏斌
• 来源期刊: 中国优生与遗传杂志
• 关键词: TaqMan探针 实时荧光PCR 单核苷酸多态性 亚甲基四氢叶酸还原酶 C677T突变 聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性 非综合征性唇腭裂
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 分子、生化遗传学与PCR技术
• 页码范围: 11-14
• 页数: 4页
• 语种: 中文

摘要

目的 建立TaqMan探针实时PCR检测人MTHFR基因C677T多态性的方法.方法设计一对MTHFR基因C677T多态位点的引物及TaqMan探针,采用TaqMan探针实时PCR扩增SNP分型方法检测唇腭裂患者及其父母共100人的MTHFR基因C677T多态性,与常规PCR - RFLP方法进行一致率比较,并对其特异性、敏感性和重复性以及成本-效益等进行评价,同时对部分实时PCR产物样本进行测序验证.结果 运用TaqMan探针实时荧光PCR技术对MTHFR基因C677T多态性检测结果准确,特异性好,与常规PCR - RFLP方法结果具有高度一致性,Kappa=0.922＞0.75(P=0.000)；检测灵敏度可达2 ×103拷贝；重复性好、高通量、无污染、安全性好；随机样品TaqMan探针分型结果与测序结果完全一致.结论 成功建立了TaqMan探针实时PCR检测人MTHFR基因C677T多态性的方法；此方法是常规临床诊断及大规模群体研究的良好平台.