基于小鼠MP-9基因的siRNA的筛选

• 作者: 刘阳 刘隆兴 唐照勇 方廖琼
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: MMP-9 B16细胞 siRNA RT-PCR
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 906-910
• 页数: 5页
• 语种: 中文

摘要

通过GenBank数据库检索,基于小鼠MMP-9基因设计特异性的siRNA干扰靶点,克隆至pGCsi-U6/Neo/GFP载体中,使用PEI衍生物包裹,转染小鼠黑色素瘤B16细胞,流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜分析细胞转染情况,RT-PCR检测24,48 h后MMP-9基因转录水平变化,筛选最佳的重组质粒和干扰靶点.结果显示:成功设计和构建了3个MMP-9-siRNA干扰质粒,3个重组质粒对B16细胞的转染率分别为60.04％、63.93％和56.27％,且3个重组质粒均能有效干扰B16细胞MMP-9 mRNA的表达,其中MMP-9-siRNA-2干扰效率最高(63％),可持续干扰MMP-9基因表达.这些结果提示,MMP-9-siRNA-2为沉默小鼠黑色素瘤细胞MMP-9基因最优的siRNA重组质粒.