土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析

• 作者: 孟军 朱庆庆 李小灵 潘忠孝 王刚 程安阳 范立强 贺婉红
• 来源期刊: 食品与药品
• 学科: 生物学
• 关键词: 土豆环氧化物水解酶 表达载体 重组表达 大肠杆菌 活性包涵体
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 237-240
• 分类号: Q55
• 字数: 3674字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-979X.2012.07.003

摘要

目的 克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因,分析其活性包涵体.方法 提取土豆总RNA,以反转录获得的cDNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),扩增得到土豆环氧化物水解酶基因,构建大肠杆菌表达质粒pET-REH,将重组表达质粒pET -REH转化E.coli BL21(DE3).结果 SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度下均主要以包涵体形式表达,只在15℃有微量可溶表达.酶活性分析表明,28℃表达的重组酶包涵体酶活性性为0.7 U/mg.结论 初步证实了存在活性包涵体的观点.