猪促炎细胞因子多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 屈素洁 施开创 李军 梁媛 莫胜兰 陈芳芳
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪 促炎细胞因子 脑心肌炎病毒 多重荧光定量RT-PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 页码范围: 117-123
• 分类号: Q938.15
• 语种: 中文

摘要

为建立及应用定量检测猪促炎细胞因子mRNA表达水平的方法,从分子水平研究脑心肌炎病毒（EMCV）的致病机制,分别构建含有猪促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及管家基因β-actin基因片段的重组质粒标准品,建立了检测IL-1β/β-actin、IL-6/β-actin、TNF-α/β-actin的多重TaqMan real-time PCR检测方法。标准曲线的相关系数均达到0.998以上;初始模板的检出下限均达到10拷贝/μL;只有以目标cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才能检测到荧光信号;组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染仔猪心肌中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平进行检测。结果表明,所建立的多重TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于猪IL-1β、IL-6、TNF-α基因的检测及定量分析。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施开创		46	217	7.0	12.0
2	莫胜兰		31	109	6.0	9.0
3	李军		21	69	6.0	7.0
4	陈芳芳		11	34	3.0	5.0
5	屈素洁		28	57	4.0	5.0
6	梁媛		11	22	2.0	4.0