肠毒性大肠埃希菌肠毒素LTa基因特异性EMA-PCR检测方法的建立

• 作者: 叶健强 叶勇刚 廖党金 曹冶 李江凌 王秋实 罗丹丹 谢晶 赵素君
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 肠毒性大肠埃希菌 不耐热肠毒素基因 叠氮溴乙锭-聚合酶链反应 检测
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 8-11
• 页数: 4页
• 分类号: S852.612
• 字数: 3031字
• 语种: 中文

摘要

由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,为避免因样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,本研究根据肠毒性大肠埃希菌(ETEC)不耐热肠毒素LTa基因设计特异性引物,利用叠氮溴乙锭(EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法.肠毒性大肠埃希菌CVCC196、CVCC197、CVCC200均能扩增出大小为438bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带.经EMA处理,除了完全死菌组外,含有10 mL/L～1 000mL/L活菌的混合悬液均可扩增出目的片段.因此,成功建立了一种快速、有效的检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法,该方法较传统PCR大大提高了检测的准确性,灵敏度可达19 cfu/mL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵素君		33	220	6.0	14.0
2	叶健强		36	78	5.0	6.0
3	谢晶		41	141	6.0	9.0
4	曹冶		30	77	4.0	6.0
5	李江凌		29	77	4.0	6.0
6	罗丹丹		17	35	4.0	4.0
7	王秋实		15	26	3.0	4.0
8	叶勇刚		28	49	4.0	4.0