小鼠TIE2基因启动子的克隆及转录活性分析

• 作者: 侯伟 廖明 畅荣妮 舒伟 袁广之 袁志刚 许淑茹 赖青鸟 陆俊佳
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: TIE2 启动子 双荧光素酶活性检测
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 90-94
• 页数: 5页
• 字数: 3166字
• 语种: 中文

摘要

克隆小鼠TIE2基因的启动子并分析其转录活性.设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠TIE2基因启动子区.将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质粒pGL3-TIE2-Luc.报告质粒与内参质粒共转染SVEC4-10、NIH3T3、HUVEC及NIT-1细胞系,48h后收获细胞检测双荧光素酶的表达情况.构建的pGL3-TIE2-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确；转染4种细胞系后进行双荧光素酶活性检测的结果表明,TIE2基因启动子区域(-2056-+1)具有较强的转录活性.成功构建小鼠TIE2基因启动子报告质粒,证实TIE2基因上游区域(-2056-+1)具有较强的启动子活性.