基于幽门螺杆菌UreB优势抗原表位多抗原肽疫苗制备及其免疫保护作用

• 作者: 严杰 张慧 王欢 王艳芳 阮萍
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位基因 优势抗原表位 多抗原肽疫苗 免疫保护
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 疫苗学
• 页码范围: 268-275
• 分类号: R37
• 字数: 6546字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.03.020

摘要

目的 构建串联式幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527原核重组表达系统,制备UreB322和UreB527表位与多肽载体Poly-Asp-Lys的多抗原肽(MAP)疫苗并确定其免疫原性和免疫保护性.方法 采用连接引物PCR构建含肠激酶(EK)位点的串联式UreB322和UreB527表位基因及其原核表达系统.表达的目的重组融合蛋白8×[rEK-UreB322-EK-UreB527-EK]经EK水解后用Sephadex G-25柱分离rUreB322-EK和rUreB527-EK片段.采用碳二亚胺法将rUreB322-EK、rUreB527-EK与Poly-Asp-Lys载体分子交联,制备出多抗原肽疫苗MAP-rUreB322/B527.采用ELISA和Western blot分别检测各重组表位肽及MAP-rUreB322/527的抗原性和免疫反应性.采用幽门螺杆菌SS1株感染BALB/c小鼠模型检测MAP-rUreB322/527免疫保护效果.结果 获得了8次重复串联的UreB322和UreB527编码基因及其原核表达系统,目的融合蛋白8×[rEKUreB322-EK-rUreB527-EK]表达量可达细菌总蛋白的48％.肠激酶可将目的融合蛋白完全水解为rUreB322-EK和rUreB527-EK片段.rUreB322-EK和rUreB527-EK与Poly-Asp-Lys交联率高达92.5％.幽门螺杆菌全菌抗体及rUreB-IgG均能识别rUreB322-EK、rUreB527-EK和MAP-rUmB322/527并与之结合.MAP-rUreB322/527免疫小鼠血清抗体水平明显高于rUreB(P＜0.05).50或100μgMAP-rUreB322/527对幽门螺杆菌SS1株感染小鼠的保护率(83.3％和91.7％)明显高于等量rUreB(41.7％和50.0％)(P＜0.05).结论 本研究成功地构建了幽门螺杆菌UreB抗原优势表位UreB322和UreB527重复串联式编码基因及其原核表达系统,基于UreB优势抗原表位的多抗原肽疫苗MAPrUreB322/527能显著提高免疫保护效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王欢	浙江大学医学院病原生物学系	35	178	7.0	11.0
2	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
3	王艳芳	杭州师范大学基础医学部	14	47	4.0	6.0
4	张慧	浙江树人大学生物工程学院	22	272	6.0	16.0