大鼠δ阿片受体基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 刘希江 卜慧莲 杨辉 逄坤芳 陈鹤翔
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: δ阿片受体 人前脑啡肽原基因 RNA干扰 慢病毒 吗啡耐受
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 329-332,352
• 分类号: R749.611
• 字数: 2709字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2012.03.017

摘要

目的 构建大鼠δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)基因小发卡RNA(shRNA)及人前脑啡肽原基因(human preproenkephalin gene,hPPE)双表达慢病毒载体并鉴定.方法 根据大鼠DOR mRNA序列设计shRNA并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入至shRNA表达载体pENTR/U6 vector中,构建shRNA表达质粒,并转化至感受态细胞DH5α,抽提质粒后进行测序.合成hPPE基因序列并插入到表达载体pcDNA3.1(+)中,转化至感受态细胞DH5α,挑取多个单克隆进行测序验证.将hPPE插入已构建成功的pENTR/U6-shRNA载体中,再与慢病毒载体pLenti7.3/V5-DEST重组,构建慢病毒载体pLenti-CMV-hPPE-U6-shRNA并转化DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并测序验证,保留测序验证正确的LR重组质粒.用构建的慢病毒表达载体pLenti-CMV-hPPE-U6-shRNA和包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,并测定滴度.结果经测序验证重组质粒pENTR/U6-shRNA、pcDNA3.1(+)-hPPE和慢病毒载体pLenti-CMV-hPPE-U6-shRNA均构建成功.大鼠δ阿片受体基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒包装成功,病毒滴度为1×107 TU/mL.结论大鼠DOR基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒载体构建成功,为研究DOR和hPPE在吗啡耐受中的作用机制及探求更加合理的镇痛方式奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨辉	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	52	362	9.0	17.0
2	卜慧莲	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	6	11	2.0	3.0
3	逄坤芳	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	1	2	1.0	1.0
4	陈鹤翔	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	2	6	2.0	2.0
5	刘希江	华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室	11	28	2.0	4.0