大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析

• 作者: 杨帅 王玲 赵奎军 韩岚岚
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆蚜 羧酸酯酶 基因克隆 活性分析
• 年，卷（期）: 2012,（18）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 3755-3763
• 分类号: S433
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.18.008

摘要

[目的]克隆大豆蚜羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础.[方法]利用RT-PCR和RACE技术,克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列,命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析,以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定.[结果]测序分析表明,羧酸酯酶基因AgCarE(GenBank登录号:JF970181)全长1 946 bp,编码526个氨基酸.羧酸酯酶AgCarE的等电点(pⅠ)为6.08,蛋白活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体):Ser186、Glu313、His434,5个N-联糖基化位点,具备羧酸酯酶的结构特征,属羧酸酯酶家族(EC:3.1.1.-).将该基因编码序列与pET-21b载体重组,经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS-PAGE分析和Western-blot检测,在大肠杆菌BL21中成功表达约59 kD的AgCarE蛋白,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036mmol/100μL酶液.[结论]成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白AgCarE,以α-醋酸萘酯为底物,检测表达的羧酸酯酶活性为0.036 mmol/100 μL酶液,有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用,为设计研发新型杀虫剂提供可能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩岚岚	东北农业大学农学院	54	318	12.0	14.0
2	赵奎军	东北农业大学农学院	134	1308	19.0	28.0
3	杨帅	东北农业大学农学院	4	60	4.0	4.0
4	王玲	东北农业大学农学院	18	105	7.0	9.0