马铃薯纺锤块茎类病毒山西分离物侵染性克隆的构建

• 作者: 冯瑞云 张忠梁 张维锋 张耀 白云凤 闫建俊
• 来源期刊: 山西农业科学
• 关键词: 马铃薯纺锤块茎类病毒 山西分离物 序列分析 体外转录 侵染性克隆
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 701-704
• 分类号: S532|S432.4+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2481.2012.07.01

摘要

马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viriod,PSTVd)侵染马铃薯会严重影响薯块的产量和品质.根据PSTVd的同源序列设计引物,以山西省马铃薯感病块茎中提取的总RNA为模板,经RT-PCR方法扩增出全长cDNA片段,将其克隆到质粒pBS-T载体上,进行序列分析.结果表明,该类病毒全长359 nt,能通过分子内序列互补形成致密的二级结构.以该序列作为种子序列进行Blast搜索,该序列与PSTVd荷兰分离物(GenBank登陆号:AY372400.1)的序列一致性为100％.将该序列与东北株系、河北株系及已公布的弱株系(GenBank登陆号:M14814.1)、强株系(GenBank登陆号:U23058.1)、中间株系(GenBank登陆号:AY937179.1)比对,有12个核苷酸具有多态性,其中有5个发生在致病区.将线性化的质粒pBS-PSTVd及其PSTVd的体外转录产物接种番茄矮红宝的无毒苗,20d后接种株轻微显症,RT-PCR检测均呈阳性.将RT-PCR产物测序,其结果与接种的PSTVd原序列完全一致,证实构建的PSTVd山西分离物的克隆具有侵染性.