肠出血性大肠杆菌毒力相关基因突变株的构建

• 作者: 侯晓军 姜楠 房华丽 李涛 王慧 王琴 罗森 肖乐
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Red重组系统 espA基因 espB基因 espD基因
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 页码范围: 640-643
• 分类号: Q78
• 字数: 2801字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.05.003

摘要

目的:利用Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、espB、espD,构建3株突变株.方法:以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增基因两翼的同源序列;将PCR产物插入pEASY-T1载体并测序,将测序正确的上、下游同源序列分步酶切,构建于pUC19-kan质粒上,经PCR获得两端同源序列中间嵌合卡那霉素抗性基因标记的线性片段,利用质粒pKD46介导的重组技术,敲除espA、espB、espD基因,之后转入pCP20质粒以去除抗性标记,最后测定突变株及野生菌株的生长曲线.结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力基因espA、es?pB、espD,获得3株突变株,突变株与野生株的生长曲线相近.结论:为进一步研究espA、espB、espD基因在肠出血性大肠杆菌O157∶H7致病过程中的作用奠定了基础.