EGFL7的重组表达及其抗体制备和初步应用

• 作者: 刘艳红 李官成 李峰 李跃辉 谢平丽
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞癌 蛋白质表达 EGFL7 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 肿瘤免疫学
• 页码范围: 117-121
• 分类号: R735.7
• 字数: 4528字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.02.005

摘要

目的:新近研究发现EGFL7蛋白与肝癌密切相关.本研究对基因egfl7进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法:通过RT-PCR方法,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增egfl7目的片段,利用基因重组技术构建pET21a(+)-TRX-EGFL7原核表达载体,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白EGFL7,SDS-PAGE鉴定.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA、Western blot方法检测抗体的灵敏度和特异性,并测定临床血清标本中EGFL7蛋白水平.结果:成功地构建了原核表达质粒pET21a(+)-TRX-EGFL7.并在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以包涵体的形式存在.SDS-PAGE和Western blot证实,重组EGFL7蛋白质与预期结果一致,抗血清能够特异地识别重组蛋白和血清蛋白质.结论:成功制备了EGFL7蛋白质和多克隆抗体,能用于后续研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘艳红		2	1	1.0	1.0
2	李峰		1	1	1.0	1.0
3	谢平丽		1	1	1.0	1.0
4	李跃辉		1	1	1.0	1.0