人EGFL7基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在人喉癌细胞中的表达

• 作者: 叶进 常利红 庄士民 张革化 王凯 黎景佳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: EGFL7蛋白 RNA干扰 喉肿瘤 慢病毒
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1864-1869
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4347字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.10.025

摘要

目的:构建人表皮生长因子样结构域7(epidermal growth factor-like domain 7,EGFL7)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,并建立稳定干扰EGFL7基因表达的喉癌细胞亚系,为研究EGFL7蛋白在喉癌发生发展中的功能奠定基础.方法:针对人EGFL7基因序列,设计特异性RNAi靶序列,与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR线性载体定向连接,得到的阳性重组子再与pLenti6.3-MCS/V5-DEST慢病毒载体进行重组,获得真核表达慢病毒干扰载体.在POLOdelivererTM 3000介导下将慢病毒包装质粒和EGFL7基因重组慢病毒载体导入293T细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染人喉癌细胞HEp-2,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰EGFL7基因的细胞亚系.结果:成功构建EGFL7 pLenti6.3-EGFL7-miR真核表达慢病毒干扰载体并获得相应慢病毒,经测定病毒滴度为5×1011 TU/L,实时荧光定量PCR证实pLenti6.3-EGFL7-miR慢病毒载体对喉癌细胞HEp-2 EGFL7基因的沉默效率为97％.结论:成功构建人EGFL7基因特异性的慢病毒干扰载体,并获得EGFL7基因稳定干扰的喉癌细胞亚系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶进	中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科	43	263	10.0	14.0
2	张革化	中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科	93	510	12.0	17.0
3	黎景佳	中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科	10	46	4.0	6.0
4	庄士民	中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科	7	31	4.0	5.0
5	常利红	中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科	12	41	4.0	6.0
6	王凯	中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科	14	55	4.0	7.0