人cystatin B基因在哺乳动物细胞株中的定位与表达

• 作者: 刘君 刘晓颖 杨军 耿慧武 范礼斌 陈应炉
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: cystatin B 细胞定位 转染 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 361-364
• 分类号: R341|R394.2
• 字数: 2320字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2012.04.002

摘要

目的 用基因克隆方法 构建带FLAG-tag的人cystatin B真核表达载体,用其转染COS-7和HEK 293 T细胞观察cystatin B在增殖细胞内的定位;转染HEK 293 T细胞检测其表达.方法 设计带FLAG-tag的引物,以人cystatin B全长cDNA序列的质粒为模板,PCR法扩增cystatin B全长序列,然后插入pCDNA 3中构建pCDNA 3-cystatin B-FLAG(CSTBF)质粒;脂质体法转染至COS-7、HEK 293 T细胞,荧光显微镜下观察其在细胞内定位;转染至HEK 293 T细胞,提取细胞总蛋白进行Western blot.结果 正确构建了pCDNA 3- cystatin B-FLAG质粒;定位实验表明在COS-7和HEK 293 T细胞中,cystatin B主要分布在细胞核内,核膜处更集中,胞浆内也有广泛分布;Western blot结果 表明该质粒能在细胞中有效表达.结论 该研究结果 为了解cystatin B在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能提供了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范礼斌	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	53	174	8.0	9.0
2	刘君	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	4	13	2.0	3.0
3	耿慧武	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	17	37	3.0	5.0
4	陈应炉	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	4	11	2.0	3.0
5	刘晓颖	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	57	121	6.0	8.0
6	杨军	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	9	94	3.0	9.0