人β4GalTⅡ基因在哺乳动物细胞株中的表达与定位

• 作者: 刘晓颖 徐雪琴 潘林鑫 耿慧武 范礼斌
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: β4GalTⅡ 转染 细胞定位 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1610-1614
• 页数: 5页
• 分类号: R341|R394.2
• 字数: 4333字
• 语种: 中文

摘要

目的：运用基因克隆技术构建人源β1，4-半乳糖转移酶Ⅱ（β4GalTⅡ）真核表达质粒，并将其转染到 COS7细胞中，观察蛋白在细胞内的定位，同时转染到 HEK 293T 细胞中检测其表达。方法分别设计带 FLAG 标签和 GFP 标签的β4GalTⅡ基因的特异性引物，以含人β4GalTⅡ全长 cDNA序列为模板，定向构建到 pcDNA3．1（＋）及 pCDGFP 真核表达载体中，构建重组表达质粒。通过酶切和测序鉴定阳性重组质粒，利用 Lipofectamine 2000分别转染 COS7、HEK 293T细胞，免疫荧光显微镜观察重组蛋白在细胞内的定位，West-ern blot 法鉴定重组蛋白的表达。结果成功构建 pcD-NA3．1-β4GalTⅡ-FLAG 和 pCDGFP-β4GalTⅡ重组表达载体，定位实验表明：β4GalT Ⅱ-FLAG 和 GFP-β4GalT Ⅱ二者在COS7细胞中均主要定位在细胞核周围，并有明显的块状染色，胞核中未见明显分布；Western blot 法检测显示重组β4GalTⅡ蛋白在 HEK 293T 细胞中稳定表达。结论获得了人β4GalTⅡ的真核表达质粒，并能在 COS7和 HEK 293T 细胞中表达，为进一步研究β4GalTⅡ的功能及其与其他蛋白的相互作用奠定了一定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范礼斌	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	53	174	8.0	9.0
2	耿慧武	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	17	37	3.0	5.0
3	刘晓颖	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	57	121	6.0	8.0
4	潘林鑫	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	19	40	3.0	5.0
5	徐雪琴	安徽医科大学生命科学学院生物学教研室	3	11	2.0	3.0