人phb1基因在哺乳动物细胞株中的转染定位和表达

• 作者: 刘晓颖 朱恒锐 武标 汪云飞 范礼斌 邢昕
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 转染 印迹法,蛋白质 哺乳动物
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 161-164
• 分类号: R341|R394.2
• 字数: 2905字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2010.02.008

摘要

目的 构建带Flag标签的phb1真核表达载体,将其转染至COS7细胞中观察phb1蛋白在细胞内的定位,并转染至HEK293T细胞检测其表达.方法 以含人phb1全长cDNA序列的质粒pLenti6-phb1为模板,用PCR方法扩增phb1全长序列,连接至T载体,构建pUCm-T-phb1,Kpn Ⅰ和EcoR I双酶切后插入真核表达载体pCDNA3中,将重组表达质粒pCDNA3-Flag-phb1转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位.转染至HEK2931、细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测.结果 经测序鉴定,成功构建了真核表达载体pCDNA3-Flag-phb1,转染后荧光显微镜观察phb1在COS7细胞中主要定位于胞质;经Western blot检测phb1基因在HEK293T细胞中能够有效表达.结论 实验结果为进一步了解phb1的功能打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范礼斌	安徽医科大学生物教研室	53	174	8.0	9.0
2	刘晓颖	安徽医科大学生物教研室	57	121	6.0	8.0
3	汪云飞	安徽医科大学生物教研室	5	1	1.0	1.0
4	朱恒锐	安徽医科大学生物教研室	5	1	1.0	1.0
5	邢昕	安徽医科大学生物教研室	4	10	1.0	3.0
6	武标	安徽医科大学生物教研室	5	10	1.0	3.0