大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶的原核表达、纯化及其酶活动态监测

• 作者: 何国维 刘虎岐 吴永红 张成岗 张晓
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甘油醛3-磷酸脱氢酶 原核表达 蛋白纯化 酶活动态扫描
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 页码范围: 32-36
• 分类号: Q78
• 字数: 3293字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1389.2012.05.007

摘要

利用大肠杆菌原核表达系统高效表达大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶,并结合蛋白分离纯化技术获得高纯度样品,动态监测其酶活.通过RT-PCR技术,扩增PC12细胞中甘油醛3-磷酸脱氢酶编码序列并亚克隆到原核表达载体pET28b；鉴定正确后,转化人大肠杆菌BL21 (DE3)细胞并采用诱导剂IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导表达,表达产物采用15％ SDS--PAGE鉴定,用镍柱对蛋白进行纯化及脱盐；最后将分离纯化产物在体外进行甘油醛3-磷酸脱氢酶酶活动态分析.结果表明,成功构建大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶的原核表达载体pET28h-G3PDH;高效表达甘油醛3-磷酸脱氢酶,表达产物占总蛋白35％,且发现表达产物主要以可溶形式分布于裂解上清；制备甘油醛3-磷酸脱氢酶纯品并通过酶活动态扫描显示其具有高效酶活性.通过大肠杆菌原核表达技术高效制备具有重要酶活作用的大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶,为进一步研究其在糖代谢中的功能以及其可能的新功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘虎岐	西北农林科技大学生命科学学院	28	98	5.0	8.0
2	吴永红	军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室	12	102	5.0	10.0
3	张晓	西北农林科技大学生命科学学院	11	83	6.0	9.0
7	何国维	军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0