土壤微生物总DNA的V3可变区PCR反应体系优化

• 作者: 殷全玉 王岩 赵铭钦 郭夏丽
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 土壤微生物DNA 16S rDNA V3区 PCR扩增 优化 热启动方式 退火温度
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 资源与环境
• 页码范围: 65-68
• 分类号: S154.3
• 字数: 3254字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3268.2012.01.016

摘要

为了优化以土壤微生物DNA为模板的PCR反应条件,采用E.Z.N.A.soil DNA kit试剂盒提取土壤微生物总DNA,对16S rDNA V3可变区的PCR反应体系和反应条件进行优化.主要从DNA模板用量、引物浓度、退火温度、热启动方式4个方面进行筛选试验,最后得出最适宜的土壤DNA扩增体系为:10.5 ng模板DNA、5μL 10×buffer、4 μL 2.5 mmol/L dNTP、10μmol/L引物各1.5 μL,2.5 UTaq酶,加无菌ddH2O补足至50 μL; PCR循环程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸70 s,29个循环；72℃延伸5 min.试验结果表明:选择热启动方式和合适的退火温度是获得高质量PCR产物的关键.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵铭钦	河南农业大学烟草学院	212	2305	25.0	36.0
2	郭夏丽	郑州大学化工与能源学院	29	426	10.0	20.0
3	王岩	郑州大学化工与能源学院	170	2188	25.0	38.0
4	殷全玉	郑州大学化工与能源学院	49	764	13.0	26.0