MR-1S融合蛋白的表达、纯化与保存及其抗血清的制备

• 作者: 卢仁泉 张菁 郭林 高翔
• 来源期刊: 检验医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 肌纤维生成调节因子1 分子克隆 抗体
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 分子生物学检验论著
• 页码范围: 835-839
• 分类号: Q503
• 字数: 4756字
• 语种: 中文

摘要

目的 通过人肌纤生成调节因子1(hMR-1S)基因重组表达获得MR-1S-His融合蛋白,纯化后制备抗MR-1S抗血清;同时确定该蛋白保存的稳定体系,为研究MR-1S蛋白理化性质及其功能提供关键的原料.方法 利用原核表达载体pET21a(+),构建pET21a-MR-1S重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导MR-1S-His融合蛋白表达,亲和纯化后Western blot鉴定;进一步用该融合蛋白免疫新西兰兔,制备抗MR-1S的多克隆抗体.同时通过在不同温度条件下,对4种不同的稳定体系中保存后蛋白活性测定进行比较,确定最合适的稳定保存体系及条件.结果 构建了重组质粒pET21a-MR-1S,并在BL21中进行可溶性表达,经Western blot鉴定确认;免疫新西兰兔获得了抗MR-1S抗血清;确定了合适的稳定体系及保存条件.结论 在非变性条件下实现了可溶性MR-1S融合蛋白的表达和稳定保存,进一步制备的抗MR-1S抗血清为研究MR-1S的性质及功能奠定了基础.