大鼠ZnT1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 宋长威 李谌 梅晰凡 胡英明
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 锌转运体-1 重组腺病毒,Gateway
• 年，卷（期）: 2012,（20）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2055-2057,2061,封2
• 分类号: R651.2
• 字数: 3894字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2012.20.020

摘要

目的 利用GatewayTM技术构建含大鼠锌转运体1(ZnT1)基因重组腺病毒载体,鉴定外源基因在真核细胞中的良好表达.方法 采用化学合成的方法,合成ZnT1/RES/EGFP目的基因片段,通过PCR方法 在基因片段两端加入attB重组位点,与含有attP重组位点的pDonr221供体载体BP反应形成入门载体pDown-ZnT1.将含有attL重组位点的入门载体与含有attR位点目的载体Ad/CMV/V5-DEST通过LR反应形成腺病毒表达载体pAd-ZnT1.酶切和测序鉴定后,由PacⅠ酶切线性化转染HEK293A细胞包装,提取病毒颗粒.采用终点稀释法测定重组腺病毒滴度;Western blotting技术分析目的 蛋白表达情况.结果 目的 基因按正确的方向重组入克隆载体中,重组腺病毒表达载体在HEK293A细胞中包装成功,获得成熟的腺病毒颗粒,病毒滴度为1.6×108 pfu/L,在HEK293A细胞中高表达.结论 该实验采用GatewayTM技术构建了含有大鼠ZnT1基因的重组腺病毒载体,为下一步研究该基因在脊髓神经细胞中的表达以及与BDNF/TrkB信号调节通路的关系奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梅晰凡	辽宁医学院附属第一医院骨科	75	204	7.0	10.0
2	李谌	辽宁医学院附属第一医院中心实验室	22	51	4.0	6.0
3	胡英明	辽宁医学院附属第一医院骨科	1	1	1.0	1.0
4	宋长威	辽宁医学院附属第一医院骨科	1	1	1.0	1.0