慢病毒介导的水牛CD14基因shRNA序列的筛选

• 作者: 乔树叶 康超 李湘萍 李美青 石德顺 覃兆鲜 路新梅 黄时海
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 布氏杆菌病 水牛CD14 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 4-9
• 页数: 6页
• 分类号: S814.8
• 字数: 4830字
• 语种: 中文

摘要

研究慢病毒载体介导的RNA干扰对水牛CD14基因表达的影响,设计并筛选具有抑制作用的靶序列.将真核表达载体pDsRed-N1-buffalo CD14转染293细胞株,建立稳定表达水牛CD14基因细胞系.同时设计5条水牛CD14 shRNA (319/421/755/970/1 041)以及1条阴性对照序列(NC-1864),构建慢病毒重组质粒pSicoR-GFP-sh RNA.采用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染293T细胞包装慢病毒,并进行滴度测定.最后,通过对慢病毒感染的pDsRedl-N1-buffalo CD14-293细胞进行QRT-PCR检测,筛选具有抑制效果的shRNA.结果显示:在各感染细胞组中,外源水牛CD14基因mRNA的表达均受到不同程度的抑制,其中,CD14 shRNA-970靶点的干扰效率最高,达到79.3％ (P＜0.01).成功筛选出具有较高抑制效果的水牛CD14 shRNA靶序列,为研究CD14基因在布氏杆菌所致炎症反应中的作用,建立家畜布氏杆菌病防治新方法奠定了基础.