猪戊型肝炎病毒ORF2-62的克隆、表达及间接ELISA方法的初步建立

• 作者: 王永霞 郝成武 马勋
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 戊型肝炎病毒 ORF2 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 238-241
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

为了获得具有反应原性的重组蛋白,以该蛋白建立初步的间接ELISA检测方法。本研究通过RT-PCR从猪粪便中克隆了戊型肝炎病毒（HEV）ORF2与急性期血清反应的抗原决定簇基因片段,将该片段插入pET-32a表达载体,命名为pET32a-ORF2-62,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,用1.0mmol/L IPTG进行诱导表达,通过Western-blotting检测其反应原性,并利用镍柱亲和层析纯化所获目的蛋白。结果,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量约为30 600,Western-blotting显示重组蛋白与HEV阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。经方阵滴定确定最佳包被浓度为7.7mg/L,血清最佳稀释比为1∶40。利用大肠杆菌表达的HEV重组蛋白建立了间接ELISA检测方法,此方法的建立为戊型肝炎早期诊断提供了一种快速简便的血清学诊断方法。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马勋	石河子大学动物科技学院	81	218	7.0	10.0
2	郝成武	石河子大学动物科技学院	3	19	1.0	3.0
3	王永霞	石河子大学动物科技学院	4	3	1.0	1.0