微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备

• 作者: 周鹏 呼高伟 张国恩 曹薇 秦培兰 米荣升 苏庆美 陈兆国 黄燕
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 微小隐孢子虫 CP15-P23-CP15/60融合基因 原核表达 重叠延伸PCR
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 54-59
• 分类号: S852.42|Q786
• 字数: 5010字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2012.07.011

摘要

以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因.利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因.将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体.结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性.