泰泽隐孢子虫CP15基因的原核表达及抗血清制备

• 作者: 宋悦 游艳敏 米荣升 苏庆美 薛方民 赵权 陆珂 陈兆国 韩先干 黄燕
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 泰泽隐孢子虫 CP15 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 寄生虫
• 页码范围: 66-71
• 页数: 6页
• 分类号: S852.723
• 字数: 4858字
• 语种: 中文

摘要

将泰泽隐孢子虫(Cryptosporidium tyzzeri)CP15基因从pMD18-T-CP15重组质粒中切下,连接至pET-28a(+)原核表达载体,经酶切和测序鉴定正确后,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化的重组蛋白免疫ICR小鼠制备多克隆抗体.结果显示,重组表达载体pET-28a-CP15在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白分子量约为17 kDa.Western blot显示重组蛋白能被泰泽隐孢子虫感染小鼠血清所识别.ELISA结果显示重组蛋白免疫小鼠血清能和泰泽隐孢子虫卵囊可溶性抗原特异性反应,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性.