HBV cccDNA SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法的建立及初步应用

• 作者: 吴学炜 周玉冰 杨晓瑞 王庆端 臧利敏 赵雪杰 郑立运
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 SYBR Green Ⅰ 共价闭合环状DNA 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 4200-4204
• 分类号: R115
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种稳定、特异、敏感的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA (cccDNA) SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.方法 根据乙肝病毒松弛环状DNA (HBVrcDNA)与cccDNA的结构差异,设计跨越双缺口的特殊引物,并利用一种ATP依赖不降解质粒的DNA酶(Plasmid-SafeTMATP dependent DNase,PSAD)提高反应的特异性;建立荧光定量PCR标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性检验.应用所建立的方法评价拉米夫定和阿德福韦酯对HBVcccDNA的抑制效果.结果 该方法能特异性检测到HBV cccDNA,在2.68×1082.68×103 copies/μl检测范围之间有良好的线性关系,相关系数为-1.00,扩增效率为102％;最低检测限为2.68×101 copies/μl.拉米夫定和阿德福韦酯对HBVcccDNA均有很好的抑制效果.结论 该实验所建立的方法稳定性强、特异性好、灵敏度高,可快速定量检测HBVcccDNA,用于抗HBV药物的评价.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴学炜		13	80	6.0	8.0
2	周玉冰	郑州大学医药科学研究院	18	42	3.0	5.0
3	王庆端	郑州大学医药科学研究院	14	108	4.0	10.0
4	郑立运	郑州大学医药科学研究院	8	33	3.0	5.0
5	杨晓瑞	郑州大学医药科学研究院	5	27	3.0	5.0
9	臧利敏	郑州大学药学院	1	8	1.0	1.0
10	赵雪杰	郑州大学药学院	1	8	1.0	1.0