CD20嵌合抗体的构建、表达及纯化的实验研究

• 作者: 朱慧兰 李润祥 李薇 梁碧华 毕超 马少吟 龚业青
• 来源期刊: 中国医药导报
• 学科: 医学
• 关键词: CD20 嵌合抗体 慢性荨麻疹 自身免疫疾病
• 年，卷（期）: 2012,（32）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 10-12,14
• 页数: 4页
• 分类号: R593
• 字数: 3047字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建CD20嵌合抗体,检测其活性并纯化该嵌合抗体.方法 从杂交瘤细胞株中分别扩增抗鼠CD20抗体的轻链和重链基因的可变区,并与人的轻链和重链恒定区连接,分别克隆到pTY5真核表达载体,然后共转染293E细胞,通过RT-PCR检测mRNA的转录,夹心ELISA检测抗体表达量,流式细胞术(FCM)分析嵌合抗体的结合特异性.结果 正确扩增得到抗CD20人鼠嵌合抗体的轻链和重链基因片段并成功构建重组真核表达载体pTY5-CD20H和pTY5-CD20L,在293E细胞中进行瞬时表达,RT-PCR显示抗体基因在细胞中进行了成功的转录,ELISA测定抗体表达量在15～24 ng/mL之间,流式检测结果证实细胞上清分泌的抗CD20嵌合抗体可与NS-1细胞株结合,并通过protein A柱亲和层析获取高纯度的抗CD20嵌合抗体.结论 成功构建表达抗CD20嵌合抗体的载体,且表达的抗体具有结合活性,为下一步研究慢性荨麻疹的发病机制及治疗打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚业青		7	26	2.0	5.0
2	梁碧华		8	39	3.0	6.0
3	马少吟		2	1	1.0	1.0
4	毕超		11	62	5.0	7.0
5	朱慧兰		20	123	7.0	10.0
6	李润祥		3	10	2.0	3.0
7	李薇		7	4	2.0	2.0