原核表达系统pET28a(+)中抗CD20微抗体的构建和表达

• 作者: 周楠楠 宋菲 曹祥荣 李东霞 杨振 潘少坤
• 来源期刊: 南京师大学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: CD20 minibody 原核表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 74-80
• 分类号: R394.4
• 字数: 4072字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4616.2012.03.014

摘要

目的:改造Rituximab,构建包含VL、VH和CH3的抗CD20微抗体minibody,并探索诱导其可溶性表达的最佳方法.方法:首先通过overlap PCR将Rituximab的VL和VH通过Linker连接在一起,成为单链抗体ScFv,再将ScFv和人源IgG1 CH3通过人源IgG1铰链区连成minibody的cDNA.将其克隆至表达载体pET28a(+)中,并在大肠杆菌中用IPTG诱导表达.结果:SDS-PAGE和Western blot结果表明,抗CD20的微抗体基因表达产物分子量约41.88 kDa,在20℃、1.0 mmol/L IPTG诱导24 h时minibody的可溶性表达量最大,同时还有包涵体形式的蛋白.可溶性抗体蛋白通过镍柱纯化,纯度达到90.25％,包涵体经过变、复性获得了高纯度的抗体蛋白.重组蛋白minibody可特异性地被兔抗人IgGl单克隆抗体识别,并且可特异性结合靶抗原CD20.结论:抗CD20微抗体minibody基因在此原核表达系统中成功表达,为其生物学功能和更好地针对B淋巴系统恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘少坤	南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室	3	6	2.0	2.0
2	李东霞	南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室	7	111	4.0	7.0
3	周楠楠	南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室	2	1	1.0	1.0
4	杨振	南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室	3	5	1.0	2.0
5	宋菲	南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室	2	1	1.0	1.0