人肌细胞增强因子2A基因病毒载体构建及嗜铬细胞瘤PC12稳转细胞系的建立和鉴定

• 作者: 于布为 陆菡
• 来源期刊: 上海医学
• 关键词: 肌细胞增强因子2 PC12细胞 反转录病毒 稳定转染 神经系统相关疾病
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 基础与危重医学
• 页码范围: 140-142
• 页数: 3页
• 语种: 中文

摘要

目的 构建表达肌细胞增强因子2(MEF2)A基因的反转录病毒载体,并观察稳定感染嗜铬细胞瘤PC12细胞后MEF2A蛋白的表达情况.方法 用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切pcDNA3-MEF2A-flag质粒,得到MEF2-flag基因的编码序列,定向插入到pBabe-puro载体中,经扩增、筛选阳性克隆、酶切和测序验证后,转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化后获取反转录病毒颗粒.将反转录病毒颗粒感染PC12细胞,经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出.采用Western印迹法检测MEF2-flag的表达情况.结果 连接重组后经酶切和测序筛选出pBabe-MEF2A-flag.转染pBabe-MEF2A-flag的PC12的细胞组中MEF2A的含量为2.03±0.06,显著高于空载体对照组的1.00±0.04(P＜0.01).结论 成功构建pBabe-MEF2A-flag反转录病毒载体,并建立了其稳定转染的PC12细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于布为	上海交通大学医学院附属瑞金医院麻醉科	228	1188	16.0	25.0
2	陆菡	上海交通大学医学院附属瑞金医院麻醉科	9	15	3.0	3.0