奶牛硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)启动子的克隆及活性分析

• 作者: 付彤 曹菁菁 杨国宇 王亚宾 韩立强 魏占勇
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 奶牛 硬脂酰辅酶A去饱和酶 启动子 胰岛素 亚油酸
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 435-440
• 页数: 6页
• 字数: 4297字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.04.008

摘要

硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)是脂肪酸合成过程中的一个主要限速酶,为了研究奶牛脂肪合成的基因调控机制,本研究首先从奶牛组织中克隆得到4个不同长度的SCD基因启动子片段(分别为212、380、416和760 bp),采用生物信息学的方法分析了启动子上不同的转录因子结合位点,将克隆片段与pGL3-basic荧光素酶报告基因载体进行KpnⅠ和Xho Ⅰ双酶切,连接形成重组启动子载体pGL3-SCD1、pGL3-SCD2、pGL3-SCD3和pGL3-SCD4.将载体纯化后,瞬时转染到HepG2细胞,对细胞施加胰岛素(10 IU/mL)和亚油酸(120 μm)处理,通过双荧光素酶报告基因检测启动子荧光素酶相对活性,结果发现,在SCD启动子序列上存在Sterol-regulated element(SRE)转录因子的结合位点,随着SCD启动子片段长度的延长,启动子活性也显著提高,pGL3-SCD4具有最高的启动子活性.与对照组相比,pGL3-SCD1～4启动子的活性在胰岛素刺激下都显著增强(P＜0.05),其中pGL3-SCD4的启动子的相对活性最高,达到了46.93.在亚油酸刺激下,pGL3-SCD 1～3的启动子活性没有显著变化,而pGL3-SCD4的活性显著减弱(P＜0.05),研究表明pGL3-SCD4启动子上增加的片段(-398～-742)可能对于SCD基因的表达调控具有重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨国宇	河南农业大学牧医工程学院	174	1205	16.0	28.0
3	王亚宾	河南农业大学牧医工程学院	92	621	14.0	21.0
4	韩立强	河南农业大学牧医工程学院	114	497	11.0	15.0
5	付彤	河南农业大学牧医工程学院	47	219	9.0	13.0
8	魏占勇	河南农业大学牧医工程学院	3	11	2.0	3.0
9	曹菁菁	河南农业大学牧医工程学院	1	8	1.0	1.0