戊型肝炎病毒ORF3蛋白的原核表达和纯化

• 作者: 傅艳琨 华修国 吴更 崔立 郭亮
• 来源期刊: 上海交通大学学报（农业科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 戊型肝炎病毒 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 页码范围: 76-82
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.ISSN.1671-9964.2013.04.014

摘要

戊型肝炎病毒(HEV)是一种无包膜、单股正链RNA病毒,其基因组长约7.2 kb,包含3个开放阅读框(ORF).ORF3位于ORF1和ORF2之间,编码含有123个氨基酸的磷酸化蛋白.本文通过PCR扩增HEV ORF3基因,将扩增产物双酶切后,插入具有相同多克隆位点的pET28a(+)、pGEX-4T-1和pET-43.1a(+)载体中,构建pET28a-ORF3、pGEX-4T-1-ORF3和pET43a-ORF3原核表达载体.将重组质粒转入E.coli DH5α,菌液PCR筛选阳性结果.序列测定正确后,将其转化E.coli BL21(DE3),加入IPTG诱导表达.SDS-PAGE分析目的蛋白表达后,进一步利用亲和层析法纯化目的蛋白.结果表明,成功构建了原核表达载体pET28a-ORF3、pGEX-4T-1-ORF3和pET43a-ORF3,所构建的载体均可在宿主菌E.coli BL21 (DE3)中表达ORF3蛋白.通过Ni-TNA和GSH-Sepharose层析纯化分别分析3种融合蛋白,发现pET43a-ORF3最适合获得纯化蛋白的ORF3蛋白,这为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础.