荧光定量PCR技术检测副溶血弧菌方法的建立与初步应用

• 作者: 吴玉娟 孔繁德 彭小莉 徐淑菲 林立 黄新新 黄标敏
• 来源期刊: 微生物前沿
• 学科: 医学
• 关键词: 副溶血弧菌 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 57-64
• 页数: 8页
• 分类号: R73

摘要

目的:建立副溶血弧菌SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。方法:根据副溶血弧菌(VP)的toxR基因序列,应用primer6.0设计了1对特异性引物,进行了最佳引物浓度的确定,建立了标准曲线和溶解曲线,对所建立方法进行了特异性、灵敏度和稳定性测试,并进行了临床样本检测。结果:副溶血弧菌SYBR Green I荧光定量PCR的最佳引物浓度为0.2 µmol/L,标准曲线循环阈值和模板浓度呈良好的线性关系,相关系数R2为0.996,扩增效率E接近100%,溶解曲线特异,最低检出量为2.14个拷贝,特异性和重复性较好。临床检测结果与常规细菌分离鉴定方法符合率100%。结论:建立了特异灵敏的副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法,对于加强进出口水产品中VP的检验检疫具有十分重要的意义。