副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

• 作者: 孙宏迪 孙岩松 宋宏彬 杜昕颖 杨振洲 汪舟佳 王玉飞 陈泽良 黄留玉
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弧菌,副溶血性 基因,tdh 实时定量聚合酶链反应 DNA探针
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 969-972
• 分类号: R378.31
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法.方法 根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及TaqMan探针,利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法.结果 以副溶血弧菌DNA为模板克隆了tdh基因,得到阳性质粒.利用阳性质粒建立了定量PCR方法,得到标准曲线y=-4.9197x+58.72,决定系数(R2)为0.9864.此方法具有很好的特异性,在对15种肠道致病菌的检测中,只有副溶血弧菌基因组DNA的扩增结果为阳性.对粪便和食物模拟标本进行检测,敏感性均为102cfu/μl.此方法重复性较好,对4种浓度(105、104、103、102cfu/μl)的菌液各进行3次检测,结果均为阳性,且Ct值的变异系数＜2%.结论 建立了一种检测副溶血弧菌的荧光定量PCR方法,该法的敏感性和特异均较好,适用于快速、准确地检测食品和粪便中的沙门菌.