RT-PCR检测草鱼呼肠孤病毒的方法研究

• 作者: 姚嘉赟 尹文林 徐洋 曹铮 林锋 沈锦玉 潘晓艺 盛鹏程 蔺凌云 袁雪梅 郝贵杰
• 来源期刊: 集美大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: GCRV 草鱼肾细胞系 逆转录聚合酶链式反应 细胞病变效应 快速诊断
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 水产科学与生物工程
• 页码范围: 8-13
• 页数: 6页
• 分类号: S941.41+1
• 字数: 3719字
• 语种: 中文

摘要

草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)为草鱼出血病的病原.本实验根据GenBank中GCRV和其他水生呼肠孤病毒毒株的第六基因片段,在其保守区设计了一对GCRV特异性引物,建立了快速检测GCRV的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法.该PCR体系中,上下游引物的最适终浓度为120 nmol/L,最适退火温度为52℃.PCR特异性试验表明:所设计的引物只能扩增GCRV的核酸,而不能扩增嗜水气单胞菌BSK-10、WSSV以及正常CIK细胞的DNA或RNA.敏感性试验表明,当GCRV的反转录模板稀释至5-7时,PCR结果还为阳性.用所建立的RT-PCR方法对5份样品进行检测,结果表明本研究建立的RT-PCR检测方法可靠且可行.