结核分枝杆菌CysA2抗原的基因克隆、表达及在血清诊断中的应用

• 作者: 吴华军 孙爱华 张佳 王宇军 皱洪兴
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 CysA2基因 重组表达 酶联免疫吸附试验 血清学检测
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 258-260,263
• 分类号: R378.91+1|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆并构建结核分枝杆菌CysA2基因原核表达系统,建立基于rCysA2的ELISA并检测rCys A2-ELISA在肺结核患者血清学诊断中的敏感性和特异性.方法 采用PCR扩增CysA2基因,构建CysA2基因原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rCysA2表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rCysA2,免疫印迹鉴定rCysA2的免疫反应性.以rCysA2为包被抗原,建立rCysA2-ELISA并用于检测132例血清抗体,其中涂片阳性和阴性肺结核患者血清分别占96例和36例,非肺结核肺部疾病病人血清抗体30例,健康对照血清50例.结果 克隆的CysA2基因与GenBank中相关序列相似性为100％.rCysA2表达量为细菌总蛋白的25.4％.提纯的rCysA2在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带.rCysA2-ELISA检测涂片阳性和涂片阴性的肺结核患者血清抗体检出率分别为63.5％和61.1％,50例健康对照全部阴性、30例非肺结核肺部疾病患者1例呈现阳性,此方法的灵敏度为62.9％(83/132),特异性为98.8％ (79/80).结论 本研究成功地克隆并构建了结核分枝杆菌CysA2基因及其原核表达系统.以rCysA2为包被抗原的rCysA2-ELISA方法有较高的灵敏度和很好的特异性,能有效检测涂片阴性患者血清抗体,rCysA2有望成为结核病血清诊断的有效候选抗原之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙爱华		112	523	11.0	15.0
2	吴华军	嘉兴市第一医院检验科	8	34	3.0	5.0
3	王宇军	嘉兴市第一医院检验科	8	37	4.0	6.0
4	张佳		9	36	4.0	5.0
8	皱洪兴	嘉兴市第一医院检验科	1	0	0.0	0.0