人Sec61β蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 任翠平 沈际佳 赵前峰 邱远欢 陆勤义
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠癌 Sec61β蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 154-157
• 页数: 4页
• 分类号: R574.6
• 字数: 2919字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2013.03.007

摘要

目的 构建人Sec61β基因的表达载体并在大肠埃希菌中表达Sec61β蛋白并制备多克隆抗体,为后续研究Sec61β蛋白及其自身抗体在人大肠癌诊断中的价值奠定基础.方法 用RT-PCR技术从人大肠癌组织中扩增出Sec61β基因,并与克隆载体pMD18-T连接转入XL1-BLUE克隆菌中,筛选出重组阳性菌落并提取质粒,用EcoR Ⅰ、Xhol Ⅰ将目的基因从重组克隆载体上切下并与同样双酶切后的表达载体pET-28a连接,转入表达菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达Sec61β重组蛋白,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况.从SDS-PAGE凝胶上切取目的蛋白免疫家兔,获得抗血清.经镍柱纯化后复性获得基因重组蛋白,以该蛋白为抗原,间接ELISA法测定血清抗体效价.Western印迹法检测抗体特异性.结果 成功扩增出Sec61β基因(270 bp),并诱导表达出Sec61β基因工程蛋白,大小约为15 kD,以包涵体形式存在.制备的Sec61β多克隆抗体经Western印迹分析,可与人体组织中目的蛋白特异性结合.结论 成功构建了Sec61β的原核表达载体并在大肠埃希菌表达了人Sec61β蛋白,通过SDS-PAGE凝胶的方法切取重组蛋白免疫家兔获得了特异性多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈际佳	安徽医科大学病原生物学教研室	84	364	10.0	14.0
2	赵前峰	安徽医科大学病原生物学教研室	2	1	1.0	1.0
3	任翠平	安徽医科大学病原生物学教研室	24	96	6.0	9.0
4	邱远欢		3	6	1.0	2.0
5	陆勤义		2	5	1.0	2.0