Nono蛋白的原核表达、纯化和多克隆抗体的制备

• 作者: 吕京澴 杨晓敏 林玲 韩晓
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: COX-2基因 基因重组 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 375-379
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 4765字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2007.05.001

摘要

目的 表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的Nono(non-POU-domain-containing,octamer-binding protein)融合蛋白并制备抗Nono多克隆抗体.方法 构建pET-28a(+)-Nono重组表达质粒,转入Rosetta(DE3)大肠埃希菌,以IPTG诱导6×His-Nono融合蛋白表达,经镍离子金属螯合树脂纯化后,用纯化出的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多克隆抗体,并用ELISA检测多克隆抗体的效价,Western印迹检测多克隆抗体的特异性.结果 在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的His-Nono融合蛋白,经亲和树脂纯化后免疫小鼠,获得了高特异性的抗Nono抗血清.结论 成功构建pET-28a(+)-Nono原核表达质粒,表达并纯化出高纯度的目标蛋白,制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩晓	江苏省人类功能基因组学重点实验室南京医科大学生物化学与分子生物学系	3	7	2.0	2.0
2	林玲	江苏省人类功能基因组学重点实验室南京医科大学生物化学与分子生物学系	1	2	1.0	1.0
3	杨晓敏	江苏省人类功能基因组学重点实验室南京医科大学生物化学与分子生物学系	1	2	1.0	1.0
4	吕京澴	江苏省人类功能基因组学重点实验室南京医科大学生物化学与分子生物学系	3	4	2.0	2.0