嵌合卵清蛋白-兔出血症VP60蛋白病毒样颗粒在杆状病毒表达系统中的表达及其鉴定

• 作者: 宋艳华 王芳 胡波 范志宇 谭晖 陈萌萌 魏后军
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒(RHDV) VP60蛋白 卵清蛋白 sf9细胞 病毒样颗粒(VLPs)
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 352-358
• 页数: 7页
• 分类号: S858.2912.65
• 字数: 5493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.02.021

摘要

利用卵清蛋白(OVA)第257 ～ 264位氨基酸替换兔出血症病毒的主要结构蛋白质VP60不同位置处相应数量的氨基酸,研究了氨基酸的替换对VP60蛋白表达及病毒样颗粒装配的影响.通过重叠延伸剪接术(SOE)法,OVA T-细胞表位(257 ～ 264位氨基酸)分别取代VP60 3个区域(502 ～ 510位氨基酸、411 ～417位氨基酸、302 ～309位氨基酸),得到3种重组嵌合VP60基因.利用杆状病毒表达系统,得到3种重组穿梭载体Bacmid,分别命名为Bacmid-V-1、Bacmid-V-2、Bacmid-V-3.将重组阳性质粒转染Sf9昆虫细胞,得到3种重组病毒rBac-v-1、rBac-v-2、rBac-v-3,3组重组病毒感染Sf9细胞后表达的3种蛋白质分别命名为Z1、Z2和Z3.经RT-PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blot等方法鉴定后,利用电镜观察此3种重组蛋白质病毒样颗粒的形成情况.3种重组嵌合VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达,3种重组嵌合蛋白质均可以形成与VP60蛋白类似的病毒样颗粒.