兔出血症病毒VP60基因在昆虫细胞中形成病毒样颗粒及其特性

• 作者: 刘家森 刘怀然 单安山 曲连东 胡迎东 陈洪岩
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 兔出血症病毒 基因,VP60 昆虫细胞 病毒样颗粒
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 448-454,封3
• 页数: 8页
• 分类号: R-33
• 字数: 5226字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2007.08.004

摘要

目的 将兔出血症病毒(RHDV)VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒(VLPs)的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力.方法 用Bac-to-Bac系统体外表达RHDV VP60全长基因.以免疫荧光及Western blotting检测蛋白表达情况及确定蛋白最佳表达条件;免疫电镜观察VLPs形态,并对VLPs的血凝性、免疫原性进行检测.结果 SDS-PAGE电泳分析表明,表达的重组蛋白分子量大小约为68 KDa,在免疫荧光、琼脂扩散、ELISA试验中均与RHD多克隆抗血清特异性反应;接种重组病毒的Sf9细胞裂解液在电镜下可观察到与RHDV形态相似的VLPs;该VLPs可凝集人"O"、"B"型红细胞,凝集可被RHD多克隆抗血清所抑制;含VLPs的Sf9细胞裂解液可不经纯化用作间接ELISA抗原,所建立的ELISA方法与进口商品化试剂盒相比,特异性良好,敏感性、检出率稍低;将含VLPs的细胞裂解液加氟氏佐剂免疫兔,HI效价可达1∶40,可经受致死量病毒攻击.结论 RHDV-VLPs的获得及其良好的免疫原性,为RHD血清学检测试剂的标准化、亚单位疫苗研制应用奠定基础,同时在转移载体及RHDV受体方面研究亦有潜在应用价值.