兔出血症病毒GS/YZ分离株VP60截段基因的原核表达及免疫效力评价

• 作者: 包世俊 孔惠萍 安凯 温峰琴 邢小勇
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒(RHDV) VP60截段基因 原核表达 免疫原性 免疫效力
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 861-870
• 页数: 10页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.05.014

摘要

兔(Lepus)出血症病毒(Rabbit hemorrhagic diseasevirus,RHDV)属杯状病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus).VP60为RHDV的衣壳蛋白与免疫原性蛋白,且其抗原表位区主要集中在N端.本研究应用反转录(reverse transcription-PCR,RT-PCR)扩增获得VP60截段基因并将其亚克隆至pMD20-T,构建原核表达质粒pET-RHDV-VP60.转化大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta(DE3)后经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,表达产物纯化后免疫Balb/C小鼠(Musmusculus)制备多抗,进而应用间接酶联免疫吸附试验(indirect enzyme linked immunosorbent assay,iELISA)和Western-blot对重组蛋白免疫原性进行分析.用混有弗氏佐剂的重组蛋白、商品苗、RHDV GS/YZ灭活苗、磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)分别注射易感兔,14d后重组蛋白组加强免疫1次,21d后用HA(hemagglutination)效价为210的RHDV GS/YZ肝脏悬液全部攻毒,观察14d,并记录结果.结果表明:RHDV GS/YZ株VP60截段基因与RHDV HB株(登录号:KU207100.1)和RHDV WX株(登录号:AF402614.1)同源性最高,达98.6％;RHDV GS/YZ株VP60截段氨基酸序列与与RHDV WX株(登录号:AF402614.1)和RHDV Mexic0 89株(登录号:AF295785.1)同源性最高,达99.1％;RHDV GS/YZ株VP60截段片段在Rosetta(DE3)中成功获得表达,且以包涵体形式存在;iELISA测定制备的多克隆抗体效价为1∶32 000;Westem-blot结果显示,重组蛋白具有良好的免疫原性;免疫保护实验表明,免疫组在攻毒后全部存活,保护率为100％,商品苗血凝抑制效价为25～28,自制灭活苗为25～26,重组蛋白加佐剂为24～25,而只注射了PBS的对照组在攻毒后的96 h全部死亡,表明大肠杆菌表达的VP60截段蛋白在混有弗氏佐剂后能够完全抵抗RHDV强毒的攻击.研究结果为RHD亚单位疫苗的研发及其快速诊断方法的建立提供了资料基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邢小勇	甘肃农业大学动物医学院	42	49	4.0	4.0
2	温峰琴	甘肃农业大学动物医学院	36	45	4.0	5.0
3	包世俊	甘肃农业大学动物医学院	43	52	4.0	5.0
4	安凯	甘肃农业大学动物医学院	2	2	1.0	1.0
5	孔惠萍	甘肃农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0