传染性法氏囊病病毒新型变异株VP2蛋白原核表达及免疫效果评价

• 作者: 马景霞 王常伟 吴洪才 何吉鑫 牛晓赛 段志强 朱杰
• 来源期刊: 南方农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性法氏囊病病毒(IBDV) 新型变异株 VP2蛋白 亚单位疫苗 免疫效果
• 年，卷（期）: 2024,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 296-303
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

【目的】构建传染性法氏囊病病毒新型变异株（vaIBDV）VP2蛋白原核表达质粒，并明确VP2蛋白的免疫原性，为vaIBDV亚单位疫苗的开发提供技术支持。【方法】从IBDV新型变异株（BZ）中扩增VP2基因片段，亚克隆至pET-28a（+）载体上构建重组原核表达质粒，并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，以IPTG诱导表达后通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定，并以vaIBDV阳性血清进行琼扩效价测定；经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后，制备乳化疫苗并免疫21日龄SPF鸡，通过安全性检验、抗体效价测定及攻毒保护评价进一步验证融合蛋白VP2的免疫原性。【结果】在25℃下以IPTG进行诱导表达，获得的融合蛋白VP2主要呈可溶性表达，大小约40 k D，且表达上清液中的融合蛋白VP2能与vaIBDV阳性血清发生特异性反应，其琼扩效价可达1∶32；经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后，融合蛋白VP2的琼扩效价高达1∶256。以融合蛋白VP2为抗原制备的亚单位疫苗稳定性好，安全性高，无免疫引起的不良反应，剖检也未发现接种部位有明显损伤、局部炎症或疫苗吸收不良等现象。免疫21 d后鸡血清琼扩效价平均值达1∶76.8，而血清抗体效价均在1∶20000以上，表明以融合蛋白VP2制备的疫苗可刺激机体产生强烈的体液免疫反应，抗体阳性率达100%；使用IBDV BZ株攻毒后7 d剖检观察鸡法氏囊病变情况，结果显示免疫组鸡只均未发病，其法氏囊也无明显萎缩现象，即免疫保护率达100%。【结论】通过原核表达系统能成功实现vaIBDV VP2蛋白的可溶性表达，且获得的融合蛋白VP2免疫原性良好，能对vaIBDV提供100%的免疫保护效果，为开发vaIBDV亚单位疫苗提供了技术支持。