含铁蛋白FAO1融合基因的衣藻核转化表达和分析

• 作者: 李明泽 程奇
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 长链脂肪醇氧化酶 信号肽 His-tag标签 衣藻核转化 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2013,（21）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种?种质资源?分子遗传学
• 页码范围: 4515-4522
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.21.014

摘要

[目的]fao1编码Candidacloacae中一种含铁辅基的长链脂肪醇氧化酶。通过构建该基因的衣藻核转化表达载体进行转化，根据表达蛋白的生物活性判断fao1能否充分利用衣藻叶绿体中的铁元素行使功能；同时也为需铁固氮酶基因的研究提供方向。[方法]通过PCR把PsaD信号肽、fao1、His-tag标签融合，连接到pDBle载体上；采用玻璃珠转化法，将重组子导入莱茵衣藻（CW15）中；经博来霉素筛选后，获得转基因植株。运用PCR和RT-PCR法检测了转化衣藻，并且用亲和层析柱纯化蛋白，同时进行FAO1活性检测。[结果]重组质粒测序完全正确；PCR和RT-PCR检测转化衣藻基因组DNA和RNA，扩增片段与预期相符；转化衣藻FAO1蛋白纯化洗脱液使ABTS（2,2′-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺盐）底物反应变色。[结论]成功构建了信号肽、FAO1和His-tag融合基因的衣藻核转化表达载体，重组质粒已整合到莱茵衣藻基因组中，并成功转录，纯化的蛋白检测有活性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程奇	中国农业科学院生物技术研究所	7	36	3.0	6.0
2	李明泽	中国农业科学院生物技术研究所	2	8	2.0	2.0