人肌球蛋白调节性轻链的原核表达及纯化

• 作者: 万青 何泽 张永臣 沈传陆 赵蕾 赵虎子 陈洋
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: MLC2 原核表达 GST融合蛋白 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 408-412
• 页数: 5页
• 分类号: Q813
• 字数: 2870字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2013.04.005

摘要

目的：构建pGEX-MLC2重组质粒，在大肠杆菌中表达并纯化谷胱甘肽硫转移酶（ GST ）-MLC2融合蛋白，以用于MLC2抗体的制备。方法：从人乳腺癌MCF-7细胞中提取总RNA，通过RT-PCR获得人MLC2 cDNA全长开放读码框架（open reading frame， ORF），并将其重组于原核蛋白表达质粒pGEX-6P-1中，经限制性内切酶和DNA测序鉴定，将该重组质粒转化大肠杆菌E．coli BL21，用异丙基β-D-硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达 GST-MIC2融合蛋白后，进行 Western blotting 分析，鉴定 GST-MLC2蛋白；通过 Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化融合蛋白，并用SDS-PAGE电泳鉴定该融合蛋白的纯度。结果：人乳腺癌MCF-7细胞MLC2的RT-PCR产物为535 bp，符合预期；重组质粒pGEX-MLC2经BamHI和EcoRI双酶切出现特征性的525 bp片段；DNA测序证实MLC2全长ORF序列正确无误。 IPTG诱导表达的GST-MLC2融合蛋白分子质量约为46.6 kDa，纯化后其蛋白纯度约95％，经Western blotting 分析表明诱导表达的蛋白是GST-MLC2融合蛋白。结论：人MLC2蛋白原核表达质粒的构建、GST-MLC2融合蛋白的表达和纯化，为MLC2抗体的制备及MLC2功能的深入研究奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张永臣	东南大学医学院病理学与病理生理学系	19	87	6.0	9.0
2	赵蕾	东南大学医学院病理学与病理生理学系	8	25	2.0	4.0
3	何泽	东南大学医学院病理学与病理生理学系	4	11	2.0	3.0
4	沈传陆	东南大学医学院	8	32	3.0	5.0
5	陈洋	东南大学医学院病理学与病理生理学系	4	9	2.0	2.0
6	赵虎子	东南大学医学院病理学与病理生理学系	4	4	1.0	1.0
7	万青	东南大学医学院病理学与病理生理学系	4	4	1.0	1.0