人tau融合蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 冯利杰 李琪 梁燕 沈玉先 王海萍
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: tau蛋白质类/遗传学 大肠杆菌 基因表达 质粒
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 367-370
• 页数: 4页
• 分类号: R341.3|R378|R394.2
• 字数: 2966字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2007.04.005

摘要

目的 构建人His-tau和GST-tau融合蛋白表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达及纯化.方法 以质粒pEGFP-tau为模板通过PCR扩增出人tau全长cDNA,并构建到原核表达载体pET28a和pGEX-5X-1中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE染色及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白.分别使用His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B与融合蛋白结合来纯化融合蛋白.结果 成功构建原核表达质粒pET28a-tau和pGEX-5X-1-tau并在大肠杆菌BL21中诱导其大量表达.经His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B纯化后,可以得到较纯化的His-tau和GST-tau融合蛋白.SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异性的抗tau单克隆抗体(tau-5)所识别的融合蛋白分子量与理论值相近.结论 构建了人tau两种原核表达的融合蛋白质粒,并高效表达和纯化了该蛋白,为进一步的tau与其它功能性蛋白的相互作用研究奠定了基础.