柑橘碎叶病毒外壳蛋白基因的原核表达

• 作者: 周常勇 宋震 李中安 李敏 段硕 陶珍珍
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柑橘碎叶病毒 CP 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 种质资源·遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 744-747
• 页数: 4页
• 分类号: S666
• 语种: 中文

摘要

[目的]获得原核表达的柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)的外壳蛋白(Coat protein,CP).[方法]以感染CTLV的柑橘叶片总RNA为模板,根据已报道CTLV设计引物,运用一步法RT-PCR对CTLV的CP进行扩增并克隆,并将CP克隆至表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得表达蛋白.[结果]扩增测序结果显示,克隆产物CP区域序列全长714 bp,与已报道CP核苷酸序列(GenBank序列号:FJ223212)相似性达100％,推测编码238个氨基酸,表达蛋白的大小约27 kD.重组质粒经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒高效表达约30 kD蛋白,酶联免疫吸附(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测结果表明,该蛋白稀释5000倍仍能与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)抗体发生阳性反应,证实表达蛋白为CTLV的CP.[结论]克隆了CTLV的CP,通过原核表达系统高效表达了CTLV的CP,为制备CTLV抗体奠定了基础.